實用貼士 | 液相色譜柱的使用
色譜柱
高效液相色譜儀
色譜柱是高效液相色譜儀的重要組成部分，在色譜儀分析系統中起著分離作用，是色譜分析的核心部件，對高效液相色譜柱的正確使用不僅能延長色譜柱的使用壽命，還能有效保證實驗結果。
以下簡單介紹液相色譜柱
在使用過程中應當注意的問題
01
性能測試
新色譜柱使用前，最好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考依據 (柱性能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異有所不同，在測試中需保證方法一致性）。
02
流動相的配制
液相色譜是通過樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
> 流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。
> 流動相具有一定惰性，與樣品不產生化學反應。
> 流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時既能得到好的分離效果，同時又降低柱壓，延長柱子的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。
> 流動相的物化性質與使用的檢測器相適應。
> 流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。
> 流動相配制好后，一定要進行脫氣，除去溶解在流動相中的微量氣體。
03
新色譜柱使用前沖洗步驟
1、首先查看色譜柱的說明書，注意色譜柱封存的溶劑、推薦流速、pH值、最大耐受柱壓、及最高使用溫度等信息。
2、如分析使用的流動相與色譜柱內儲存的溶劑混溶，可以直接使用流動相參照色譜柱說明書中推薦的流速、溫度等條件沖洗色譜柱20倍柱體積以上。如果分析條件使用的流動相與色譜柱內儲存的溶劑不混溶，請選擇與色譜柱內儲存溶劑和流動相都混溶的溶劑，作為置換溶劑，逐步置換到分析使用的流動相。每次置換均應沖洗色譜柱20倍柱體積以上。
04
日常使用注意事項
1、請使用HPLC級別以上的試劑作為流動相。
2、流動相要用0.45um孔徑以下的微孔濾膜濾過。
3、流動相的pH值不能超出色譜柱的適用范圍。
4、注意流動相的流動方向要與色譜柱標識的方向一致。
5、容易滋生微生物的流動相不要存放過久，要及時換新，以免微生物滋生污染色譜柱。
6、色譜柱分析結束后要及時徹底沖洗。
7、長時間不用的色譜柱要將流動相置換為色譜柱保存的溶劑，并兩端用堵頭封死保存。
8、色譜柱要避免劇烈碰撞、跌落等。
05
流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數，使用不用的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對于內徑4.0mm柱，流速0.8mL/min為最佳。當選用最佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當增加有機試劑甲醇或乙腈的含量）。
液相色譜柱在色譜分析中起著至關重要的角色，是樣品分離的核心，正確使用色譜柱才能達到更好的理想的分離效果，提高色譜柱的使用壽命。
島津液相色譜儀LC-40
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