2019年CAIA獎一等獎獲獎項目成果簡介：基于電子顯微鏡和單克隆抗體檢測與鑒定重要作物病毒的關鍵技術
完成單位： 浙江大學分析測試中心、浙江大學生物技術研究所、浙江省農業科學院
完成人：洪健、吳建祥、謝禮、王亞琴、李云琴、尚衛娜、宋西嬌、呂明芳、王春艷、周雪平
成果簡介：
我國糧食、蔬菜、水果、花卉等重要作物病毒病的防控具有對高靈敏度、高適用性現代分析測試技術的重大需求。本成果開展了基于電子顯微鏡和單克隆抗體檢測與鑒定作物病毒的關鍵技術研究，規范了透射電鏡和掃描電鏡檢測鑒定作物病毒及樣品制備的技術方法，制訂了3項國家標準。應用冷凍電鏡在國際上首次解析了玉米褪綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒的三維結構；應用電鏡等技術手段研究部分作物病毒的致病機制，在國際上首次闡明了蠶豆萎蔫病毒的細胞間運動模式。研制了12種作物病毒高效、靈敏的單克隆抗體，其中8種單抗為國際獨創，申請國家發明專利15件，授權9件；建立了以單抗為基礎的ACP-ELISA、dot-ELISA、膠體金試紙條等7種高靈敏的快速檢測技術，其靈敏度和特異性處于同類產品國際先進水平。有效地將上述兩種現代分析測試技術集成創新、互為驗證、高度融合，在全國農業植保系統和出入境檢驗檢疫部門廣泛應用，為我國重要作物病毒的綠色防控提供了關鍵技術保障。
創新點及科學價值：
（1） 首次建立了黃瓜綠斑駁花葉病毒的電子顯微鏡檢測方法，并規范了我國電子顯微鏡檢測鑒定植物病毒的通用技術方法，制訂了3項國家標準，填補了國內空白。
（2） 在國際上首次運用冷凍電鏡技術解析玉米退綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒等的三維結構，在國際上首次闡明了蠶豆萎蔫病毒以管狀結構進行細胞間運動的模式，創建了運用常規電鏡和冷凍電鏡研究作物病毒的新方法及新應用。
（3） 研制了12種重要作物病毒的單克隆抗體，其中8種單克隆抗體為國際獨創。建立了以單抗為基礎的ACP-ELISA、dot-ELISA、膠體金免疫試紙條等7種高靈敏的病毒快速檢測技術，檢測靈敏度和特異性處于同類產品國內外先進水平，實現了田間和口岸現場的快速檢測。
社會經濟效益：
（1） 本項目創建的重要作物病毒高靈敏檢測技術體系為作物病毒病害的源頭控制和科學綠色防控提供了核心技術與產品支撐，在各水稻產區有效控制了傳毒介體的傳毒及病毒病暴發流行的態勢，農藥使用次數減少2-3次，使用量減少30%以上，節約了農藥和勞動力成本，增產增收效益顯著。在其他經濟作物產區，通過檢測篩選應用脫毒或無病毒種子種苗（種薯、種球），促進了優質脫毒馬鈴薯種薯、綠色蔬菜、花卉等產業的健康發展，保障了農產品綠色生產，為農民脫貧攻堅與增產增收提供了高新技術支撐。
（2） 本項目建立的病毒快速檢測技術，突破了我國長期以來作物病毒檢測技術缺乏、檢測試劑盒主要依賴從美歐等發達國家進口、植物病毒病難以準確鑒定的技術瓶頸，提高了作物病毒檢測鑒定的速度、靈敏度、廣譜性和準確性，改變了我國檢驗檢疫領域缺少自主檢測技術的被動局面，為我國作物病毒檢測鑒定和口岸一線植物檢驗檢疫提供了重要技術保障，同時，節約了購買進口試劑盒的大量外匯。
（3） 本項目研制的單抗檢測試劑盒與膠體金免疫試紙條主要提供給國內各科研協作單位、出入境口岸以及農業基層單位使用，在進行檢測試劑盒與試紙條的產業化后可產生顯著的直接經濟效益。
應用前景：
目前該項成果制訂的3項國家標準已正式實施，創制的12種作物病毒單克隆抗體及多種快速檢測技術已在全國各科研協作單位、出入境口岸以及農業基層單位推廣使用。具有獨立自主產權的單克隆抗體免疫檢測技術的創立，突破了我國長期以來作物病毒檢測技術缺乏、檢測試劑盒主要依賴從美歐等發達國家進口、作物病毒病難以準確鑒定的技術瓶頸，提高了作物病毒檢測鑒定的速度、靈敏度、廣譜性和準確性，推廣應用前景遠大。
