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上海首個(gè)核酸產(chǎn)業(yè)園7月正式開工，一起來聊聊寡核苷酸藥物解鏈溫度
導(dǎo) 讀
近年來，以核酸藥物為首的功能性核酸備受關(guān)注，2021年底治療罕見病脊髓性肌肉萎縮的反義寡核苷酸藥物諾西那生鈉進(jìn)入中國(guó)醫(yī)保，幾乎同一時(shí)間，諾華降血脂的小干擾RNA藥物L(fēng)eqvio獲FDA批準(zhǔn)上市，據(jù)悉一年只需用藥兩次。寡核苷酸藥物已經(jīng)從罕見病過渡到了常見慢性病，并可大大降低患者用藥頻率。
隨著寡核苷酸類藥物的陸續(xù)上市，核酸藥物已成為當(dāng)前生命科學(xué)和藥物研究的熱點(diǎn)之一。為了更好促進(jìn)核酸藥物的快速發(fā)展，上海首個(gè)核酸產(chǎn)業(yè)園于7月中旬在上海杭州灣經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)正式開工，該產(chǎn)業(yè)園是以生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)為發(fā)展方向，基于核酸開發(fā)各種疫苗及藥物。今天，我們就一起來聊聊核酸藥物以及解鏈溫度等話題。
01
核酸藥物小科普
核酸類藥物
核酸類藥物是各種具有不同功能的寡聚核糖核苷酸(RNA)或寡聚脫氧核糖核苷酸(DNA)，能夠直接作用于致病靶基因或者靶mRNA，在基因水平上發(fā)揮治療疾病的作用。常見的寡核苷酸藥物主要包括反義寡核苷酸（ASO）、小干擾RNA（siRNA）、微小RNA（microRNA）、小激活RNA（saRNA）、適配體（Aptamaer）、信使RNA（mRNA）。
解鏈溫度
在這些核酸藥物中，對(duì)于具有雙鏈結(jié)構(gòu)的藥物，需要對(duì)其解鏈溫度進(jìn)行分析。解鏈溫度是衡量雙鏈結(jié)構(gòu)核酸類物質(zhì)熱穩(wěn)定性的重要指標(biāo)，它是控制結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)鍵因素。例如小干擾RNA（siRNA）藥物等具有雙鏈結(jié)構(gòu)，當(dāng)溫度升高時(shí)，氫鍵斷裂，雙鏈逐漸解體，形成單鏈結(jié)構(gòu)。這種現(xiàn)象稱為核酸的“溶解”，將雙鏈和單鏈所占比例相等的溫度定義為解鏈溫度(Tm）。
因?yàn)楹怂犷愇镔|(zhì)在260 nm附近有一個(gè)紫外吸收峰，吸收值在解鏈過程中增加，通過測(cè)試該吸光度變化，以確定Tm值。因此在進(jìn)行核酸藥物Tm值分析時(shí)，可以利用紫外分光光度計(jì)加上控溫附件和對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)分析軟件來完成。
02
分析利器
對(duì)于核酸解鏈溫度Tm測(cè)試，島津擁有成熟的方法和分析設(shè)備，該設(shè)備一般為UV-1900i配Tm分析系統(tǒng)(TMSPC-8)。Tm分析系統(tǒng)由8列控溫支架、專用8列微量比色池、溫度控制器和Tm分析軟件構(gòu)成，最多可同時(shí)測(cè)定8個(gè)樣品。
UV-1900i和Tm分析系統(tǒng)
專用8列微量比色池（光程10 mm）
03
案例分享
接著小編帶您看看具體的寡核苷酸分析案例，操作步驟簡(jiǎn)單快捷，結(jié)果直觀。
測(cè)試樣品為M13-25mer核酸，測(cè)試前先進(jìn)行樣品溶液脫氣的預(yù)處理，通過UV-1900i和Tm分析系統(tǒng)可以輕松獲得Tm 曲線（繪制260nm處的吸光度對(duì)溫度曲線，如下圖所示），該曲線可以顯示升溫時(shí)和降溫時(shí)的結(jié)果。
樣品的Tm曲線
測(cè)試完成后，可以通過中線法和微分法兩種方法計(jì)算Tm值，最終得到的Tm值結(jié)果基本一致。
Tm計(jì)算結(jié)果
結(jié) 語(yǔ)
核酸分子的解鏈溫度對(duì)核酸藥物的穩(wěn)定性、有效性等研究有重大意義，在核酸藥物研發(fā)生產(chǎn)過程是一個(gè)重要的參數(shù)指標(biāo)。島津紫外配合Tm分析系統(tǒng)，可以滿足輕松獲取Tm曲線，通過中線法或者微分法均可計(jì)算Tm溫度，滿足測(cè)試要求，為核酸藥物質(zhì)量控制提供了可靠數(shù)據(jù)。
更多寡核苷酸藥物分析，敬請(qǐng)持續(xù)關(guān)注。
撰稿人：王娟娟
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