“強強聯手”——生物惰性液相與多角度光散射檢測器聯用，助力雙抗分子量準確測定
雙特異性抗體（簡稱“雙抗”）是一種新型的抗體藥物，它可以同時發揮兩種單抗聯用的協同作用，臨床價值很高，但其質量控制的要求也非常嚴格。在雙抗研發生產過程中，需要對雙抗分子的大小異質性進行測定，以確認雙抗的連接情況，保障產品質量。
然而雙抗分子量的測定條件中不僅需要使用高濃度的鹽進行洗脫，而且紫外檢測器無法直接得到分子量，這對常規液相系統管路的耐腐蝕性及檢測器提出了挑戰。
本文采用島津生物惰性液相色譜儀Nexera XS inert搭配多角度光散射檢測器（MALS）測定雙抗分子量，為推斷雙抗連接情況提供分析依據。
分析條件
流動相A：50mM磷酸鹽緩沖液+300mM NaCl（pH=6.8）
流動相B：乙腈
檢測器1：二極管陣列檢測器SPD-M40A
檢測器2：多角度光散射檢測器MALS
樣品制備條件及其他分析條件略
結果
MALS需要通過測定已知分子量的標準溶液得到儀器響應常數，圖1是牛血清蛋白標準溶液(66500Da)色譜圖，計算得到MALS響應強度為2.9626×10-7，SPD-M40A響應強度為8.8552×105。
圖2為雙抗樣品色譜圖，該樣品為單抗Fc端融合型雙抗，雙抗樣品檢出3個主要色譜峰，計算得到峰1、峰2、峰3重均分子量Mw分別為197708Da、145121Da、56401Da，三峰重均分子量與數均分子量的比值（Mw/Mn）均為1.00，峰2與峰3分子量之和201522Da，與峰1分子量偏差為1.92%，因此推測出：
峰1為雙抗（單抗Fc端融合scFv）
峰2為單抗（未融合scFv）
峰3為單鏈抗體scFv。
雙抗分子量測定信息見表1。
圖1 牛血清蛋白標準溶液色譜圖
圖2 雙抗樣品色譜圖
表1 雙抗樣品分子量分布
結論
本文通過體積排阻色譜法（SEC）聯合多角度光散射檢測器（MALS）對單抗Fc端融合型對稱分子樣品大小異質性進行分析，SEC根據分子量大小分離雙抗樣品，MALS檢測器測定雙抗樣品分子量，從而推斷雙抗樣品連接情況。此方法簡單高效、準確度高，可用于測定雙抗樣品分子量。
Nexera XS inert生物惰性系統將 UHPLC 系統的高壓耐受性與完全惰性的樣品流路完美結合，確保沒有金屬表面的吸附作用，且具有高耐腐蝕性，從而為生物分子的分離提供了理想的解決方案。
● 更大限度降低因金屬吸附而造成的損失
● 輕松應對高鹽濃度和極端pH流動相的挑戰
● 獲得卓越的靈敏度、重現性和分離度
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